英文名稱：Plasmid ezFilter Midiprep Kit II
中文名稱 :快速過濾法質(zhì)粒中量提取試劑盒I/II
編號:PD1414-01
規(guī)格: 10次
品牌：biomiga
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| 說明 : |
| 50~100 mL 細(xì)菌培養(yǎng)液中純化400 μg高純度質(zhì)粒DNA 試劑盒組分： | Catalog # | PD1414-01 | | Preps | 10 | | ezBindTM Columns | 10 | | Filter syringe（25 mL） | 10 | | Buffer A1 | 55 mL | | Buffer B1 | 55 mL | | Buffer C1 | 70 mL | | Buffer KB | 50 mL | | RNase A （20 mg/mL） | 5.5 mg（275 µL） | | Elution Buffer | 20 mL | | User Manual | 1 | 保存條件： RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。 注意事項(xiàng)： - 質(zhì)粒拷貝數(shù)：純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí)，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同體積的Wash Buffer （70% 乙醇）和Elution Buffer.
- 轉(zhuǎn)化菌：若為-70oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個菌落進(jìn)行培養(yǎng)。切勿直接取凍存在4℃的菌進(jìn)行培養(yǎng)。
- 柱結(jié)合能力：450 μg
操作簡明步驟： - 取100 µL新鮮的菌液接種到15-80 mL （勿超過 100 mL）的LB培養(yǎng)基（含適量抗生素），37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入5 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細(xì)菌沉淀重新懸浮。
- 加入5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
- 加入6 mL Buffer C1, 立即反轉(zhuǎn)5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
- 將裂解液轉(zhuǎn)移至過濾器中，放在一個50 mL的試管上靜置10分鐘。管中的白色絮狀沉淀浮上來，對準(zhǔn)50 mL的管向下壓，使裂解液盡可能多的通過，有些裂解液可能會殘留在沉淀中。注：靜置10 分鐘時(shí)RNase A將工作，排除RNA污染。
- 加入6 mL 100% 乙醇，立即混勻，需馬上離心過DNA柱。
- 立即轉(zhuǎn)移6.0 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)此步直至所有的溶液通過DNA柱。
- 可選: 向DNA柱中加入4.0 mL Buffer KB, 室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
- 向離心柱中加入5.0 mL 70% 乙醇，室溫下>2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“9”。
- 將離心柱放回高速離心機(jī)中，室溫下>2,500 x g 開蓋離心10分鐘，以*去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉(zhuǎn)至一個新的15 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入0.5-1 mL滅菌ddH2O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置1分鐘，>2,500 x g離心5分鐘，以洗脫質(zhì)粒DNA。若想提高得率，將15 mL離心管中的洗脫液再加到柱的中間，>2,500 x g離心5分鐘以洗脫質(zhì)粒DNA。
操作流程：  |
