佰易聚生物商城提供的分子生物學(xué)試劑和試劑盒、美國聯(lián)合碳化和美國光譜醫(yī)學(xué)透析袋、培養(yǎng)基和培養(yǎng)耗材、細(xì)胞因子和細(xì)胞分離液、抗體和elisa試劑盒及常用生物試劑等,大量現(xiàn)貨火爆*,歡迎登錄www.ebioeasy.com或者,，洽談選購！
英文名稱：Plasmid ezFilter Megaprep 10 Kit
中文名稱 :快速過濾法質(zhì)粒超大量提取試劑盒
編號(hào)：PD1614-01
規(guī)格: 2次
品牌：biomiga
| 說明 : |
| 試劑盒組分： | Catalog# | PD1614-01 | | Preps | 2 | | DNA Unit | 2 | | Filter Unit | 2 | | Replacement Cup | 2 | | Buffer A1 | 210 mL | | Buffer B1 | 210 mL | | Buffer C1 | 250 mL | | Buffer KB | 110 mL | | RNase A （20 mg/mL） | 21 mg（1.1 mL） | | Elution Buffer | 60 mL | | User Manual | 1 | 保存條件： RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。 注意事項(xiàng)： - 質(zhì)粒拷貝數(shù)：純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí)，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同體積的Wash Buffer （70% 乙醇）和Elution Buffer.
- 轉(zhuǎn)化菌：若為-70oC甘油凍存的菌，請(qǐng)先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
- 柱結(jié)合能力：10 mg
操作簡明步驟： - 取500 µL新鮮的菌液接種到1,200-1,500 mL （勿超過 2,000 mL）的LB培養(yǎng)基（含適量抗生素），37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入100 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細(xì)菌沉淀重新懸浮。
- 加入100 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
- 加入120 mL Buffer C1,立即反轉(zhuǎn)幾次至出現(xiàn)絮狀白色沉淀。渦漩震蕩10 秒。充分混勻后，溶液將會(huì)變得顏色均一，如果此時(shí)溶液顏色不均一，均局部顏色過深，建議將溶液輕甩幾次，以充分混合溶液，室溫下靜置10分鐘。
- 將雙層Filter unit與500 mL或1000 mL的滅菌瓶（Corning# 430518 or 430282 or equivalent） 連接，旋緊，再將此裝置與真空負(fù)壓裝置連接。
- 先將步驟“5”中底部較澄清的裂解產(chǎn)物用50 mL移液管轉(zhuǎn)移至雙層Filter unit中，靜置5分鐘后打開真空裝置，使負(fù)壓由低到高，5分鐘后增至zui大（0.04 Mpa）。
- 當(dāng)大部分裂解液已被過濾時(shí)，關(guān)掉真空負(fù)壓裝置，等候1分種，拆卸裝置，移去雙層Filter unit。
- 再將DNA unit杯與一個(gè)新的滅菌的500 mL或1000 mL的滅菌螺口標(biāo)準(zhǔn)瓶連接，旋緊。并將過濾嘴與真空負(fù)壓裝置連接。將步驟“7”中收集到的裂解液中加入120 mL 100%乙醇，立即混合均勻，立即將一半倒入DNA unit杯中，開啟負(fù)壓裝置，進(jìn)行過濾吸附操作。
- 再將剩下一半倒入DNA unit杯中，當(dāng)所有裂解液已過濾完，再維持真空1分鐘后，關(guān)掉負(fù)壓裝置。
- 在DNA Unit杯中加入50 mL Buffer KB，開啟負(fù)壓裝置至zui大（0.04Mpa）并維持1分鐘，使Buffer KB*通過DNA Unit杯。
- 在DNA Unit杯中加入50 mL 70%乙醇，開啟負(fù)壓裝置至zui大（0.04Mpa）并維持1分鐘，使乙醇*通過DNA Unit杯。重復(fù)此操作步驟一次。
- 在DNA Unit杯中加入80 mL100%乙醇，開啟zui大負(fù)壓維持1分鐘，關(guān)掉負(fù)壓裝置，倒掉瓶子中的廢液，將DNA Unit杯重新連接至標(biāo)準(zhǔn)瓶上，開啟負(fù)壓裝置至zui大負(fù)壓，真空抽20分鐘，以充分去除殘留的乙醇。
- 關(guān)掉負(fù)壓裝置，靜置一分鐘，移去標(biāo)準(zhǔn)瓶，將DNA Unit 連接至一個(gè)新的50 mL的離心管中，并旋緊。
- 加入12 mL 滅菌 ddH2O或者Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上，室溫放置2分鐘，打開負(fù)壓裝置至zui大（0.04 Mpa）洗脫DNA。此時(shí)會(huì)收集到5~6 mＬ洗脫液，這是1st 洗脫液。
- 關(guān)掉負(fù)壓裝置，將DNA Unit連接至一個(gè)新的50mL的離心管中，加入12 mL 滅菌 ddH2O或者Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上，室溫靜置2分鐘，開啟負(fù)壓裝置至zui大（0.04 Mpa）洗脫DNA。此時(shí)會(huì)收集到約8-10 mL洗脫液，這是2nd洗脫液。
操作流程：  |
