瓊脂糖凝膠DNA /PCR產(chǎn)物大量回收試劑盒 步驟說明
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備注：本公司銷售的所有產(chǎn)品僅用于生化科研試驗(yàn)
英文名稱：DNA Gel/PCR Purification Maxiprep kit
中文名稱 :瓊脂糖凝膠DNA /PCR產(chǎn)物大量回收試劑盒
編號(hào)： DC3531-01
規(guī)格: 10次
品牌：biomiga
膠回收/PCR產(chǎn)物純化簡(jiǎn)明步驟（DC3531）
使用前請(qǐng)注意：
l 使用前請(qǐng)分別在DNA Wash Buffer中加入8 mL （DC3531-00） 或者60 mL（DC3531 -01） 或者96 mL （DC3531-02） 或者60 mL （DC3531-03） 100% 乙醇。
l 溶解100 mg的瓊脂糖凝膠，約需要100 µL Buffer GC。
l 溶膠液GC 在較低溫度下易沉淀，若溫度較低，出現(xiàn)沉淀，使用前請(qǐng)?jiān)?/span>37 oC加熱幾分鐘，至沉淀溶解后再使用。
l 本試劑盒吸附柱吸附能力為80µg，所有操作步驟均在室溫下進(jìn)行。
用戶自備材料:
R 100% 乙醇
R 臺(tái)面離心機(jī)和1.5 mL 微型離心管
R 55-60 oC 水浴（膠回收時(shí)用）
R 真空裝置（真空步驟時(shí)用）
R 小于200 bp的片段的可加異丙醇。
PCR產(chǎn)物純化/膠回收離心法操作步驟：
1. PCR產(chǎn)物純化：在1倍體積的PCR反應(yīng)物中加入2倍體積的 Buffer GC，渦旋充分混勻。對(duì)小于200 bp的PCR產(chǎn)物，加入5倍體積的Buffer GC。
膠回收：將含DNA的瓊脂糖凝膠切下，轉(zhuǎn)至1.5 mL離心管中，再加入1倍體積的Buffer GC （100 mg的凝膠加入100 µL Buffer GC）。在55-60 oC下培育8分鐘左右，且每隔2分種輕彈試管底部，直至膠溶解*，放置使其冷卻至室溫。
建議:
R 為取得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)使用新鮮配制的電泳緩沖液制膠和電泳。
R 切膠時(shí)，盡量縮短在紫外燈下照射的時(shí)間，以減少紫外對(duì)DNA的損傷，并盡量切除不含DNA的凝膠。
R 若DNA片段小于200 bp，請(qǐng)加入1體積的異丙醇。
2. 轉(zhuǎn)移700 µL DNA/Buffer GC 混合溶液至離心柱中，室溫下，13,000 x g下離心1分種，棄廢液，將離心柱放回收集管中。重復(fù)此步使剩余的溶液通過柱子。
3. 加入300 µL of Buffer GC到離心柱中，室溫下13,000 x g離心30-60 秒，棄廢液。
4. 加入650 µL DNA Wash Buffer （確保已將乙醇按說明書要求加入DNA Wash Buffer中），室溫下在13,000 x g下離心30秒，棄廢液。重復(fù)步驟4。
4. 13,000 x g開蓋再次離心3分鐘，以去除柱中殘余的乙醇。
注意：此步操作對(duì)DNA的產(chǎn)率多少極為關(guān)鍵。
5. 將柱子放入干凈的1.5 mL試管中，向柱中加入在60oC 下預(yù)熱的50-100 µL （>50 µL） Elution Buffer或ddH2O。在室溫下放置1分鐘。13,000 x g 離心1分種以洗脫DNA。將洗脫液重新上柱，再次離心洗脫。
建議: 將洗脫緩沖液預(yù)熱到65 oC，加洗脫液后將柱子整個(gè)溫育5分鐘后再離心洗脫可以增加DNA回收效率。
對(duì)大于8kb的片段，加洗脫液后將柱子整個(gè)溫育15-30分鐘可以提高回收效率。
PCR產(chǎn)物純化/膠回收真空/離心法操作步驟
1. 將含DNA的瓊脂糖凝膠切下，轉(zhuǎn)至1.5 mL離心管中，再加入1倍體積的Buffer GC（100 mg的凝膠加入100 µL Buffer GC）。在55-60oC下培育8分鐘左右，且每隔2分種輕彈試管底部，直至膠溶解*，放置使其冷卻至室溫。
2. 準(zhǔn)備真空裝置，將柱子與歧管連接。
3. 將 DNA/Buffer GC 混合溶液轉(zhuǎn)移至離心柱。
4. 打開真空裝置，溶液流下。
5. 加入650 µL的DNA Wash Buffer漂洗離心柱。
6. 重復(fù)步驟5。再真空抽2分種。
7. 將柱子放入收集管，開蓋在zui高速離心2分種以除去乙醇。
將柱子放入干凈的1.5 mL試管中，向柱中加入50-100 µL （>50 µL）Elution Buffer或ddH2O。在室溫下放置1分種。13,000 x g 離心1分種以洗脫DNA。
